阿胶蛋白质含量测定方法

人气 4930   2012-4-10 17:46

中药阿胶由煮熬驴皮所得胶液浓缩干燥而成。据有关报道,阿胶多由骨胶原(Collagen)组成,其水解可得明胶、蛋白质及多种氨基酸。阿胶的蛋白类含量约为60%~80%左右[1]。龚跃新等对8种商品阿胶用盐酸水解后测得总氨基酸量为46.2 %~78.8%[2]。据有关报道用酚试剂法以牛血清白蛋白(下称BSA)作参比,比较以不同皮为原料制成的阿胶蛋白质含量,最高含量为76.9%,最低为62.6%。由此表明所报告的阿胶蛋白质含量差异很大。这种差异除作者分析样品中所含水分和辅料(药典未限量)不一外,测定蛋白质的方法(包括所用参比和结果计算)也各不相同,因此寻找一种可靠的阿胶蛋白质定量方法以保证阿胶质量至为必要。我们以牛血清白蛋白作对照品,通过五种常用方法—— 考马氏亮蓝法、双缩脲法、改良双缩脲法 、紫外分光光度法和凯氏定氮法对阿胶蛋白质含量结果进行了分析比较,现概述如下。

反应原理

蛋白质是生命的物质基础,是构成生物体细胞组织的重要成分,蛋白质是含氮的有机化合物,是有机态氮的表现形式。样品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵,然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再用硫酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即得蛋白质含量

讨论与结论

多年来,利用蛋白质的主要性质(如含氮量、肽键、折射率等)和利用蛋白质含有的特定氨基酸残基(如芳香基、酸性基、碱性基等),测定蛋白质的方法不断发展,主要有凯氏定氮法(国际经典测定方法)、分光光度法、电化学法、滴定法、高压液相色谱法、电泳法、免疫法等。了解各种蛋白质测定方法的原理和技术特点,对在实际工作中选择适宜的分析方法具有重要的指导意义。

凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏和吸收、滴定 3 个过程。测定蛋白质最常用的方法是凯氏定氮法,它是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一,被国际国内作为法定的标准检验方法。该法关键环节有浓硫酸用量、催化剂选择、消化时间、氢氧化钠用量和硼酸吸收液指示剂选择等。本实验测定阿胶总氮量与有关文献测得阿胶总氮量相接近。因此,选择凯氏定氮法测定阿胶总氮量。

综上所述,只有凯氏定氮法适合测定阿胶,其他方法并不适用。可能因为每一种方法都有其自身的特点,并不是在任何条件下适用于任何形式的蛋白质。每种测定法都不是完美无缺的,都有其优缺点。在选择方法时应考虑:①实验对测定所要求的灵敏度和精确度;②蛋白质的性质;③溶液中存在的干扰物质;④测定所要花费的时间。

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